circRNA在糖尿病中介导视网膜血管功能障碍
栏目:最新研究动态 发布时间:2017-09-08
circRNA已被证明在血管性疾病、神经障碍和癌症中异常表达,然而其在糖尿病诱导的血管内皮功能紊乱中的作用尚未见报道......

最新 circRNA 文章——首次揭示 circRNA 在糖尿病中介导视网膜血管功能障碍

近期,来自复旦大学,南京医科大学的研究人员发表了题为“ Circular Non-Coding RNA HIPK3 Mediates Retinal Vascular Dysfunction in Diabetes Mellitus ”( IF=19.3 的文章,首次揭示 circHIPK3 在糖尿病引起的 视网膜血管功能障碍中的关键作用和调控机制。

研究简介

circRNA 已被证明在血管性疾病、神经障碍和癌症中异常表达,然而其在糖尿病诱导的血管内皮功能紊乱中的作用尚未见报道。作者利用采用 qPCR Sanger 测序、 northern blot 等 检测糖尿病相关应激的 circHIPK3 表达模式。 MTT,EdU,transwell matrigel assays 体外检测 circHIPK3 在视网膜内皮细胞功能中的作用。视网膜胰蛋白酶消化,血管通透性测定, ELISA 测定法检测 circHIPK3 视网膜血管功能障碍中的作用。生物信息学分析、荧光素酶活性分析、 RNA pull down 、体内研究,揭示了 circhipk3 介导的视网膜血管功能障碍的机制。最后验证 circhipk3 作为 miRNA 海绵吸附 miR-30a-3p ,增强 VEGFC, FZD4 WNT2 的表达,参与调控视网膜血管功能障碍。

研究方案

1 cirRNA 的筛选

根据报道, circHIPK3 在人脐静脉血管内皮细胞( HUVECs )中高表达。 circBase 检索发现 HIPK3 宿主基因可能产生 20 circRNA ,作者对这些候选的 circRNA 进行 PCR 鉴定发现人和小鼠的视网膜内皮细胞各存在 4 2 circRNA, RNase R 处理后检测到 2 个人 circRNA 1 个小鼠 circRNA 。最后选择与小鼠 circRNA 保守的人 circHIPK3 进行下一步验证。

blob.png blob.png

2 cirRNA 的表达模式

作者利用 qPCR northern blot sang 测序,结合 RNAse 处理验证 circHIPK3 的客观存在,利用核质分离 PCR FISH 检测 circHIPK3 的亚细胞定位。并验证其在糖尿病小鼠模型和高糖细胞中高表达。


......


查看更多

登入已有账号/注册会员