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microRNA实时定量PCR

microRNA实时定量PCR
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microRNA 实时定量PCR检测服务
实时荧光定量PCR技术是在普通PCR反应体系中加入荧光试剂,通过仪器对扩增过程中每一个循环的荧光信号进行实时检测从而实现对起始模板定量或定性的分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地精确定量起始模板浓度。成熟microRNA是由21-25个核苷酸组成的小RNA,由于长度太短,不能通过传统的实时定量PCR进行检测。本公司通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,配合实时定量PCR引物及SYBR® Green荧光染料可以精确检测微量样品中microRNA表达水平。
本公司提供的microRNA实时定量PCR检测服务具有以下特点:①高特异性——只对成熟MicroRNAs进行定量,而不受其前体干扰;还可以在高度同源性的microRNAs之间进行区分,在某些实验中甚至只有一个碱基的差异都能鉴别。②快速,简单——整个操作只需两步,不到3个小时,即可获得高质量的数据。③灵敏——样品消耗少,仅需1-10ng的total RNA或同等物;如此之高的灵敏度使得研究者可以用有限的样品做更多的实验,比如做全套microRNAs表达谱研究。也有利于诸如干细胞,配对的人类肿瘤/健康对照等珍贵且很难获得的样品的节约使用。④超宽的线性范围——可跨越7个数量级,这意味着研究者可以准确的知道所用实验材料的每个细胞所含的目标microRNA分子多还是少(这一点很重要,因为microRNA的表达丰度在不同种类的细胞,组织以及疾病中变化范围很大)。⑤具有很好的重复性,由不同的研究者操作时也能体现。
英拜生物为您提供microRNA 实时定量PCR技术服务,您只需要提供保存完好的组织或细胞标本,本公司专业的技术服务人员就可替您完成microRNA实时定量PCR实验操作和数据分析,提供给您完整的实验报告,为您节省大量的时间和精力。
英拜生物microRNA实时定量PCR技术服务流程如下:

  1. 引物设计、合成
    设计并合成目的microRNA的茎环RT引物、PCR引物。

  2. 样品RNA抽提
    a.组织样品:取适量(50~100mg)新鲜组织或正确保存的组织样品,匀浆后抽提RNA。
    b.细胞样品:取1×106~1×107细胞,吸去培养液后用TRIZOL试剂抽提RNA。

  3. RNA质量检测
    a.紫外吸收测定法测定RNA在波长260nm和280nm的吸收值,获得RNA的浓度并通过A260/280及A260/230的吸收比值判断RNA的纯度。
    b.用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳,检测RNA纯度和完整性。
    注:用于microRNA实时定量PCR检测的RNA样品,必须高纯度、完整,没有RNase 污染(降解的样品不能用于实时定量PCR检测),同时提取方法必须保证所得样品包含完整的小RNA部分。

  4. 逆转录合成cDNA
    利用茎环引物逆转录合成cDNA第一链。

  5. 实时定量PCR
    以合成的cDNA作为模板进行实时定量PCR扩增(同时测定每个样品中U6 snRNA含量作为内参以校正上样误差)。

  6. 分析结果、提供实验报告
    分析实时定量PCR结果,根据标准曲线定量样品中的目的microRNA。提供实验报告,包括详细的实验方法,实时定量PCR实验数据和图表



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